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2002年10月，波尔山羊克隆项目在天津市正式启动，项目由天津市畜牧兽医研究所、天津市农业生物技术研究中心共同承担，并开展国际合作，课题由刘海军博士主持，由世界克隆技术权威专家、美国得克萨斯大学美籍华裔科学家刘灵博士提供技术指导。课题还得到天津市科委、市财政局等单位的资助和支持。
“从澳大利亚引进的波尔山羊到位后就开始着手工作了，经过近两年时间的前期准备，积累了一些经验。最初我们想一步到位，直接开展最复杂的波尔山羊体细胞克隆研究，结果没有成功，主要原因是实验设备不过关，当时实验室里有一台国产的融合仪已经用了多年，质量老化，控温效果差，细胞难以融合，最终试验都失败了。”天津市农科院畜牧兽医研究所所长丁伯良博士说。
天津市畜牧兽医研究所把市财政局支持的30万元全部购买仪器设备，先后进口了显微操作仪、胚胎冷冻仪、拉针仪、二氧化氮培养箱等先进仪器设备。
“体细胞克隆是最尖端的克隆技术，它是选取波尔山羊的表皮细胞作为核供体，技术难度比胚胎克隆还要大，因此成功率更低。既然技术条件不成熟，直接开展体细胞克隆难度很大，我们只能改变策略了，先易后难，先从胚胎克隆着手开展研究，并采取体细胞克隆和胚胎细胞克隆技术交叉研究的方式进行。”刘海军说，课题组近10名科研人员，每个人负责不同的项目，比如有人专门负责羊场管理，有人负责实验数据的获取，有人负责试验前期工作，而关键技术则由刘海军自己完成，整个过程实际是团队合作的结果。
根据技术方案，波尔山羊体细胞克隆大致可分四步走：一、首先选取普通山羊(受体)的卵母细胞，将其细胞核取出。二、从波尔山羊(供体)耳部切取一小块皮肤细胞，然后进行体外培养；皮肤细胞经传代培养后，消化为单个细胞，取出细胞核。三、将供体的细胞核移植入受体的已去核的卵母细胞内，进行电融合，以便激活卵母细胞，形成重构胚。四、把重构胚移入普通山羊，怀胎五个月，产下体细胞克隆的波尔山羊。
课题主持人刘海军博士说，在四个环节中，最复杂的为第三个环节，即核移植，所有操作均在显微镜下进行，在操作时手不能抖，心更要稳，稍有不慎就会前功尽弃。“核移植是克隆技术的关键，难度非常大，这是一个精细活，操作过程比绣花还难，我已经操作了五年多时间了，现在成功率也不高。”
“2002年和2003年是最艰难的时间，每年做大的试验要进行三四次，小试验要做几十次，但是每次都以失败告终，做完试验以后，要么羊怀孕不了，要么就是母羊中途流产。做一次大的试验要用二三十只本地山羊作为受体，每年做三四次试验花了不少试验经费，却没有成功。一次次试验又一次次失败，那段时间刘海军博士情绪很低落。我就鼓励他，克隆是当今世界的前沿科技，不可能一挥而就，只要好好做总有一天是会成功的。现在刘海军已全面掌握了这项技术。”丁伯良博士说。
从2004年起，科研人员把试验重点放在胚胎克隆上，并采取体细胞克隆和胚胎细胞克隆技术交叉研究的方式进行。天津市科研人员经过三年的刻苦攻关，2005年11月2日，世界首例胚胎克隆波尔山羊“津生”成功降生。一年后，“津生”与普通波尔山羊自然交配并成功受孕，怀孕期间各种体征与一般怀孕山羊并无两样。由胚胎克隆的波尔山羊成功分娩表明，津门科学家在动物克隆技术领域已走向成熟，并为该技术在生产领域的广泛应用打下良好基础。
“世界首例胚胎克隆波尔山羊‘津生’的成功问世并健康成长，给参与研究的科研人员极大的鼓舞。通过近五年时间探索研究，我们已掌握了大量的科研数据和操作经验，课题组有信心在两年内完成体细胞克隆实验。”丁伯良说。
2006年“波尔山羊体细胞克隆技术研究”课题被市科委列为天津市科技攻关项目。当年11月份美国克隆技术权威、华裔博士刘灵再次飞赴天津，专程来指导项目组进行体细胞克隆羊实验。经过精心准备，11月2日课题组进行克隆的关键技术核移植。科技人员成功从波尔山羊耳部皮肤细胞取得的细胞核移植到已去核的普通山羊卵母细胞内，进行电融合，形成重构胚，然后将其移植到普通山羊的体内受孕。经过5个月的怀胎，全国首例体细胞克隆波尔山羊终于问世。
“由美籍华裔科学家刘灵博士提供技术指导，但操作是咱们科研人员完成，应该说所有实验过程全部由本市科技人员独立自主完成。如果说世界首例胚胎克隆波尔山羊‘津生’的诞生填补了本市动物克隆领域的空白，那么全国首例体细胞克隆的问世，已标志着本市动物克隆技术跃居国际先进水平，而达到这一成就天津科学家花了整整七年时间。”丁伯良博士说。
动物体细胞克隆技术是畜牧业科研领域的尖端科技，国内首例波尔山羊体细胞克隆的成功，天津的科学家们用了近七年时间，进行了近百次试验，当中经历了多次失败，最终他们取得成功了。国内首例体细胞波尔山羊“津英”的诞生凝聚着津门科学家们的智慧和汗水，新报记者独家探访津门科学家成功的背后故事。
克隆动物无伦理问题
优良品种存入基因库
“克隆人存在伦理道德问题，但是克隆动物不存在伦理道德问题，其益处非常多的！”丁伯良博士说，最直接的一个好处就是永久保存优良品种，只要建立基因库，把动物最好的基因保存下来，就能“复制”出最好的动物。
对于研究动物克隆技术的科学价值，天津波尔山羊克隆研究项目负责人刘海军博士更是津津乐道，他说研究动物克隆技术，首先可以实现家畜良种的快速繁育。传统的动物育种方法基本是优选劣汰，以选择效应的世代积累以实现动物群体的遗传改良，但这种育种方法费时费力，效率低，育成一个良种一般需要几十年时间。然而通过克隆技术，建立基因库，只要把优良品种保存下来，短时间内就能实现良种的快速繁育。
其次，克隆技术还可用于抢救和保护珍稀动物。利用胚胎分割、核移植和干细胞培养等克隆技术直接“复制”和繁育珍稀动物。大熊猫、金丝猴、东北虎、娃娃鱼、扬子鳄等珍稀野生动物都可以通过克隆技术来加以抢救和保护。
第三，克隆技术还可以用于医学，为人类遗传疾病的研究提供动物模型，为人类器官移植提供便利。另外，克隆技术可以运用于转基因技术，以提高转基因效率。
波尔山羊肉家门口尝鲜
1996年7月世界首例体细胞克隆绵羊“多利”在英国问世，1997年2月“多利”的身份被媒体公开披露后，许多国家掀起了克隆研究热潮，欧美等发达国家在此领域的研究一直走在世界前列。
“动物克隆技术在畜牧业生产、转基因动物研制和医学领域中具有巨大的潜在应用价值，不尽快启动此项领域研究，不仅无法追赶国际前沿科技，连国内同行也要把我们远远甩在后面！”天津市畜牧兽医研究所所长丁伯良说，既然要做就做最好的，尽快追赶世界科技的前沿，所以他们选择了世界上肉质最好的，且国内同行没有涉足的波尔山羊作为克隆研究对象。
2000年7月，天津市农科院从澳大利亚引进了38只波尔山羊，波尔山羊原产地为南非，后来被引进到澳大利亚等地饲养，经过多年培育繁殖，这些波尔山羊已经相当成熟，适合用于试验研究。但是，这些波尔山羊价格昂贵，每只种公羊价格高达2.6万元，种母羊则从1.8万元至2万元左右。而国内的本地山羊则每只大约500元，也就是说，一只进口的波尔山羊其价格相当于国内50只本地山羊的价格。一名科研人员开玩笑说，一块正宗的波尔山羊肉比国内的整只羊还贵，富豪们花“天价”也不一定能吃上，所以他们进行的研究就是想尽快让津门百姓吃上正宗的波尔山羊肉。
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